猪RNase L与PRRSV nsp4缺失突变体的构建及其互作研究

于莹; 李均同; 丛晓燕; 齐静; 刘思当; 郑乾坤; 孙文博; 王爱国; 郑龙祥; 吴香菊; 杜以军; 单虎; 《畜牧与兽医 》 2021 北大核心

摘要：RNase L是一种独特的核糖核酸内切酶,在机体的抗病毒过程中发挥重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）非结构蛋白4（nsp4）具有3C样丝氨酸蛋白酶活性,是参与病毒多聚蛋白前体切割的主要蛋白酶,是影响病毒粒子成熟的重要蛋白。课题组前期研究发现猪RNase L（sRNase L）能够与nsp4互作发挥抗PRRSV作用。为了筛选sRNase L与nsp4互作的区段或位点,本研究分别构建了sRNase L与nsp4的截短体或突变体,通过免疫共沉淀试验进行筛选,结果显示突变体sRNase L R460A、sRNase L R675A、sRNase L Y720A、sRNase L F724A都能够与nsp4发生互作,只有缺失体sRNase L 1～586 aa不与nsp4互作,表明sRNase L第3结构域（587～744 aa）为与nsp4互作区段,但该区段不包括第675位精氨酸、第720位酪氨酸、第724位苯丙氨酸;分别包含nsp4三个结构域的截短体nsp4-D1（1～80 aa）、nsp4-D2（60～156 aa）、nsp4-D3（157～204 aa）中,只有nsp4-D1与sRNase L发生互作,表明nsp4的1～60 aa为与sRNase L互作区段。本研究为进一步探究sRNase L与nsp4互作抗PRRSV机制奠定了基础,为预防和控制PRRSV感染提供了新的思路和方法。

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征症 猪核糖核酸内切酶L 非结构蛋白4 免疫共沉淀

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